产品描述:
PEI 是基因转染中常用的高分子载体。PEI 是一种带正电荷的阳离子聚合物,极易与带负电的核酸分子结合形成复合物,该复合物再与细胞表面带负电荷的蛋白多糖相互作用,通过胞吞作用进入细胞。
KEL Biotech PEI Transfection Reagent 是一种基于分子量 25 kDa PEI 的 DNA 转染试剂,通过引入可特异性结合 DNA 的功能基因对 PEI 进行改性,显著增强了 PEI 和 DNA 的结合能力,并且降低了细胞毒性。另外,通过功能性优化显著增强了 PEI 的细胞摄取、内涵体逃逸等功能。
KEL Biotech PEI Transfection Reagent 具有细胞毒性小、转染效率高、稳定性强及操作简便等优点,在多种细胞系中都能实现高效、低毒的 DNA 转染,包括 HEK-293、HEK-293T、CHO-K1、COS-1、COS-7、NIH/3T3、Sf9、HepG2 和 HeLa 等细胞。高性价比使其可广泛用于大规模重组蛋白表达和病毒生产等工业领域。
操作流程:
1. 细胞准备
转染前一天接种细胞,使转染时细胞处于良好生长状态。不同细胞系的最佳细胞密度可根据实际情况优化。
| 项目 | 推荐起始条件 |
|---|---|
| 细胞密度 | 转染时约 50%-80% 融合度 |
| 质粒 DNA | 1 μg |
| PEI Transfection Reagent | 2.5 μL |
2. DNA/PEI 复合物制备
1. 使用无血清培养基或其他适宜的无血清稀释液分别稀释质粒 DNA 和 PEI Transfection Reagent。
2. 分别轻柔混匀后于室温静置约 5 min。
3. 将稀释后的 PEI Transfection Reagent 加入稀释后的 DNA 中,轻柔混匀,室温孵育约 15 min 形成转染复合物。
3. 转染
1. 将 DNA/PEI 复合物均匀滴加至细胞培养液中,轻轻晃动培养皿使其分布均匀。
2. 将细胞置于正常培养条件下继续培养。
3. 根据细胞类型和实验目的,可在转染后约 4-6 h 更换新鲜完全培养基,也可在细胞耐受良好的情况下不更换培养基。
4. 通常在转染后 24-48 h 检测目的基因表达;用于蛋白表达或病毒包装时,可根据实验设计适当延长培养时间。
注:验证实验中,1 μg GFP plasmid 搭配 2.5 μL PEI Transfection Reagent 可获得良好转染效果。最佳 DNA : 转染试剂比例应根据细胞类型进行优化。
| 规格 | 10ml |
| 储存条件 | -20℃保存1年 |
| 有效期 | 1年 |
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