产品介绍

KEL Biotech品牌的 5X All-In-One RT MasterMix 反转录试剂盒使用高效快捷，用于第一链cDNA的合成，同时也包含了基因组DNA去除步骤。在RNA的提取过程中，基因组DNA（gDNA）的污染对下游实验的进行具有重要影响，它会导致假阳性的出现以及对基因表达水平的错误判断。因此，高效地去除gDNA对于保证实验数据的准确性是最有效合理的方法。5XAll-In-One RT MasterMix反转录试剂盒中包含合成第一链cDNA所需的，除RNA模板外的所有试剂，可随时取用。在这完整体下所得产物在下游实验中具有广泛应用，孵育5分钟的cDNA产物可直接用于下游qPCR反应，孵育10分钟可用于下游PCR反应。

实验操作

所有的反应都要求在无RNA酶的环境中进行。推荐使用PCR专用移液枪和滤芯枪头。

1.解冻试剂，并摇晃混匀液体。解冻的试剂放于冰上，按照下表进行反转录实验：

2.按照下表所示进行反转录反应。

注意事项

●  Poly(A)+mRNA和总RNA都可用于第一链cDNA的合成，但是Poly(A)+mRNA更有可能得到高产量且更纯净的cDNA产物。

●  如果想要更有效地去除gDNA，请将37℃孵育的时间从建议的5–10分钟增加到15–30分。

●  如果想要清除和cDNA结合的RNA，可以加入1μl的 E.coli RNase H（货号E018）后在37℃条件下温育20分钟。