产品介绍
KEL™ Safe-Red Gel (10,000×in Water)
Safe-Red Gel（10,000×in Water）是用于核酸凝胶电泳的一款高灵敏、无致突 变性的安全性荧光染料。
Safe-Red Gel 主要适用于紫外亦兼容于蓝光凝 胶成像系统 。
应用范围：核酸凝胶电泳
产品特点：
高稳定：本产品可室温保存；可 100 ℃ 高温煮沸；
高灵敏：灵敏度是溴化乙锭的 10-100 倍，最低可以检测 100 pg DNA 样本；
高安全：通过环境动物测试实验和 Ames 突变性双重验证，证明本产品无致突变性 和与环境无害。
注意事项：
1. 本产品在蓝光下成像效果不如紫外，因此推荐使用紫外凝胶成像系统。 2. 推荐使用 TAE 电泳缓冲液并及时更换，保持电泳缓冲液新鲜。 3. 染料无需低温冷藏，请于室温下储存，室温下储藏过久可能会出现干管现象，可 以直接加入蒸馏水并加热 45-50 ℃ 进行震动充分溶解后即可。若放置低温包括 4℃ , 若发现沉淀，请将染料加热至 45-50 ℃ , 振荡溶解，亦不影响使用效果。 4. 本产品仅限于科研用途并且不得存放于普通住宅内。 5. 为了您的安全和健康，请遵循您所在常规实验室安全规定。
操作步骤：
KEL™ Safe-Red Gel 的使用方法和 EB 一致。 KEL™ Safe-Red Gel 可以按适当 比例直接 加入琼脂糖中配制成凝胶，也可以在电泳完毕后对凝胶进行染色。前者更加 方便， 而后者灵敏度要更高一些。但由于 Safe-RedGel 本身已经非常灵敏， 通常采用把 KEL™ Safe-Red Gel直接配制在凝胶中就可以了。对于一些特殊情况， 如核酸样品量特别 少的情况等，则可以考虑电泳后再对凝胶进行染色。
1. 前染法：
（1）按照标准方案制备琼脂糖凝胶溶液或根据需要配制适当浓度（例如 1%~3%）琼 脂糖胶液；
（2）在琼脂糖完全融解后，适当冷却但又不会使琼脂糖凝固时（ Safe-RedGel 可以像 EB 一样在琼脂糖凝胶液加热融解后但未凝固前加入并混匀，也可以在琼 脂糖融解前加入，然后再微波炉加热融解并混匀），按照每 50 mL 胶液加入 5 μL Safe-RedGel 的比例（10000 ︰ 1）加入 Safe-Red™Gel，混匀后即可 把琼脂糖胶 液倒入制备凝胶的模具中；
（3）按照标准操作步骤进行电泳凝胶实验，适量的 DNA 或 RNA 在该胶中电泳后， 用 300 nm/254 nm 紫外线透照器对凝胶进行成像在紫外灯下可以观察到明亮的核 酸条带。
2. 后染法：
（1）根据标准方案运行凝胶电泳，完毕后对琼脂糖凝胶染色；
（2）制备 3 × 工作液染色，即将 KEL™️Safe-Red Gel 10,000 × 储液稀释约 3,300 倍到 0. 1 M NaCl 水溶液中，如若需要配置 100 mL 3 × 工作液，则需要将 30 μL Safe-RedGel 10,000 × 储液和 100 mL 0. 1 M NaCl 溶液中；
（3）把电泳完毕的琼脂糖凝胶放到适当的容器（如聚丙烯容器）中，加入适量上述 配制好的 Safe-RedGel 染色液，确保至少盖住凝胶（注意：不要使用玻璃 容器 ，因为它会吸附大部分染色液中的染料）；
（4）在摇床上缓慢摇动（约30-50 rpm）染色 20-60 分钟。染色时间根据胶的厚度 而定，胶厚则染色时间需要长一些，胶薄则染色时间可以短一些；若想缩短时间， 可以采用放置摇床前对染色液进行预加热 50-60 ℃ 然后再倒入凝胶；
（5）染色完毕后无需任何洗涤步骤，在紫外灯下即可观察核酸条带。若要观察到更 为清晰的条带，可以在染色后用水漂洗1-2 次，每次 3-5 分钟，以消除背景。Safe-RedGel 染色液可以重复使用 3 次左右。KEL™ Safe-Red Gel 染色液也可 以一 次大量制备，在室温下避光保存，直至用完。
（6）后染法如果用的是聚丙烯酰胺凝胶，聚丙烯酰胺凝胶可以直接在玻璃平皿上染 色，将配好的工作溶液轻轻地倒在胶板上，让工作液均匀地覆盖整个胶板，并染 色 30 分钟。玻璃平皿必须预先经过硅烷化溶液处理（避免染料吸附在玻璃表面上）。
注 ：1）电泳时间不要超过 2 小时；
2）在常规用酒精沉淀核酸的过程中， Safe-Red ™Gel 可以全部从双链 核酸 上去掉；
3）染色效果一旦不佳，从上样量、电泳条件包括电泳液是否新鲜，以及染料 与胶是否混匀、染料是否析出等因素考虑。
3. 实验效果图（图 1）
图 1 EB（左）与 Safe-Red Gel（右）染色对比效果图 |
FAQ
1. 问：为什么染RNA 的效果不如染 DNA 的好？
答：此款核酸染料都与 dsDNA 、ssDNA 和 RNA 结合，但敏感性不同。相对于 ssDNA 和 RNA ，此款染料对应 dsDNA 的敏感性更好。RNA 本身就容易分 解，导致跑电泳时会分解，效果会更差。
2. 问：跑胶时发现条带光亮度很弱或者背景很强如何改善？
答：（1）条带亮度减弱，极大困难是染料从溶液中沉淀析出，此时可以将本产品 溶液加热至 45-55℃ 之间 3-5 分钟，然后涡旋溶解即可；
（2）背景高，极大可能是琼脂糖质量不佳导致。
3. 问：跑电泳时出现模糊条带或者笑脸条带、条带扭曲甚至条带会多出，如何解决？
答：由于本款染料属于大分子和高亲和力染料，旨在提高其安全性，由此会影响到 预制胶中的DNA 迁移。
解决方案如下： （1）减少 DNA 上样量，一般推荐为原上样量的三分之一左右即可；
（2）使用较低含量琼脂糖的凝胶，较高分子量的 DNA 会分离效果更好；
（3）出现多的条带是由于本产品特别高的灵敏度导致，DNA 样本不纯，通常 这种不纯条带在灵敏度低的染料如 EB 无法被检测出来。
4. 问：此款染料可以用于甲醛基 RNA 凝胶和聚丙烯酰胺凝胶？
答：（1）可以；
（2）使用聚丙烯酰胺凝胶时，推荐用后染法，如对于含有 3.5%-10%丙烯酰 胺的聚丙烯酰胺凝胶，典型的染色时间为 30 分钟至 1 小时，丙烯酰胺含量 较高的凝胶需要更长的染色时间。
5. 问：此产品是否与克隆、连接和测序等下游应用兼容？
答 ：对。一些用户反馈称，在本染料存在的情况下对 DNA 进行 PCR，无需纯化 步骤，例如通过在 TE 缓冲液中孵育本款产品染色的凝胶切片，通过被动扩 散提取 DNA 用于 PCR，或使用几微升来自含有 DNA 的本款产品染色凝胶 切片的熔融琼脂糖用于 PCR。
6. 问：在熔融的琼脂糖里面，本款染料的稳定性如何？
答：我们不建议将 KEL™ Safe-Red Gel 在熔融琼脂糖中储存超过几天。但是未使 用 的含有本款染料的凝固琼脂糖可以重新熔化。如果未使用的含染料琼脂糖要 储存一天左右，我们建议将其避光保存。
7. 问：染色后，建议采用哪些纯化方案去除 Safe-Red Gel？
答 ：我们建议使用我们的 DNA 凝胶提取试剂盒从 DNA 样本中去除本款染料， 但一些客户报告说，通过苯酚-氯仿提取成功去除了本款染料。客户还反馈说， 使用 Zymo Research 的 ZymoClean凝胶 DNA 回收试剂盒 、Sigma 的 GenElute TM 琼脂糖旋转柱、Life Technologies 的 PureLink ® 快速凝胶提取试剂 盒、GE Healthcare 的 illustra GFX PCR DNA 和凝胶带纯化试剂盒、罗氏应用 科学公司的高纯 PCR 产品纯化试剂盒和 Thermo Scientific 的 GenJET 凝胶 提取试剂箱，效果良好。
