产品介绍

【产品原理 】

【主要组成成份 】

细胞内 、细胞外冷冻保护剂 ，缓冲液

【产品性能指标 】

外 观 ：淡 黄 色 透 明 液 体 ；  装 量 ： 100mL       内 毒 素 ：＜0 . 1  EU/mL       pH值 ：25℃时 ，7 .0 -8 .5

无菌及支原体 ：阴性

稳定性 ：产品在过了有效期的一个月内仍应保持其各种性状的稳定性 。

【使用方法 】

1 、细胞冻存前准备

（1）要 求 冻 存 的 细 胞 活 率 大 于 90%(外 周 血 提 出 的 白 膜 层 可 立 即 冻 存 )。

（2）计 算 细 胞 密 度 ，不 同 细 胞 冻 存 密 度 请 参 照 附 表 。

2 、细胞冻存过程

（1）将 要 冻 存 的 细 胞 悬 液 ，进 行 细 胞 计 数 ，计 数 后 离 心 ，400g ，10min即 可 。

（2）弃 去 上 清 ，将 4度 保 存 的 细 胞 冻 存 液 缓 慢 加 入 离 心 后 的 细 胞 沉 淀 中 ，根 据 密 度 调 整 细 胞 冻 存 液 用 量 。 （3）反 复 吹 吸 混 匀 后 ，分 装 于 细 胞 冻 存 管 中 ，每 管 500ul- 1000uL。

（4）将 分 装 好 的 细 胞 冻 存 管 ，程 序 降 温 盒 中 程 序 降 温 或 程 序 降 温 仪 降 温 ，投 入 液 氮 中 保 存 即 可 。

备 注 ：  1)细 胞 冻 存 管 一 定 要 保 证 完 全 密 封 ，否 则 在 复 苏 过 程 中 有 可 能 会 炸 裂 。

3 、细胞复苏过程

（1）提 前 开 启 水 浴 锅 ，温 度 调 节 到 37℃ 。

（2）将 冻 存 的 细 胞 冷 冻 管 从 液 氮 中 取 出 ，迅 速 置 于 水 浴 锅 中 融 化 ，尽 量 1min融 化 ，时 间 越 短 ，对 细 胞 影 响 越 小   （3）将 融 化 后 的 含 细 胞 的 冷 冻 保 存 液 迅 速 析 出 置 于 新 鲜 培 养 基 中 充 分 混 匀 ，如 细 胞 冷 冻 保 存 液 为 500uL ，则 加 入 到 5mL完 全 培 养 基 中 ，如 细 胞 冷 冻 保 存 液 为 1mL ，则 加 入 10mL完 全 培 养 基 中 。

（4）混 匀 后 立 即 离 心 ，400g ，10min即 可 ，离 心 结 束 后 弃 上 清 ，加 入 预 温 的 新 鲜 培 养 液 。

（5）将 适 量 的 新 鲜 培 养 基 缓 缓 加 入 细 胞 沉 淀 中 ，轻 柔 混 匀 ，将 混 匀 好 的 细 胞 移 至 事 先 准 备 好 的 培 养 容 器 中 。混 匀 后 分 瓶 置 于 二 氧 化 碳 培 养 箱 中 培 养 。（ 二 氧 化 碳 浓 度 根 据 培 养 基 要 求 决 定 ，通 常 为 5%）。

附表 ：