3.操作程序：
3.1 手工染色
3.1.1 脱蜡、水化和抗原修复:
1)脱蜡前，应将切片在烘片机上 60℃烘烤30 min；
2)切片置于二甲苯中浸泡，更换 2 次二甲苯，每次浸泡 10 min；
3)切片置于无水乙醇中浸泡两次，每次 5 min，95℃乙醇中浸泡 5 min，75%乙醇中浸泡 5min；
4)PBS 缓冲液洗 3 次，每次 3min；
5)玻片置于 EDTA pH9.0 热修复 20min 后自然冷却至室温；
6)PBS 缓冲液洗 3 次，每次 3 min。
3.1.2 手工染色步骤:
1)内源性过氧化物酶屏蔽。使用 3%的双氧水滴加在切片上室温静置 10 min，此步骤应避光操作；
2)PBS 缓冲液洗 3 次，每次 3min；
3)滴加 100ul 即用型一抗在切片上(需全面覆盖样本)，室温孵育 30min；
4)PBS 缓冲液洗 3 次，每次 3min；
5)除去 PBS 缓冲液，滴加 100ul 二抗-A 液于切片上，室温孵育 15 min；
6)PBS 缓冲液洗 3 次，每次 3 min；
7)除去 PBS 缓冲液，滴加 100ul 二抗-B液于切片上，室温孵育 15 min；
8)PBS 缓冲液洗 3 次，每次 3 min；
9)应用 DAB 显色液显色，5-8min。自来水冲洗终止反应；
10)应用苏木素反染，滴加苏木素于切片上，静置 10-30s，用自来水温柔冲洗结束染色；
11)PBS 溶液或自来水冲洗返蓝；
12)自来水浸泡 1 次，75%乙醇脱水处理 1 次，95%乙醇脱水处理 1 次，100%乙醇脱水处理 2 次，每次室
温下静置 3min；
13)用二甲苯透明 3 次，每次 3 min；
14)使用中性树胶加盖片，完成染色。
4.结果判断每一批次检测样本应同时设立阳性/阴性对照，最终检验结果由具有临床资质的病理医生来判读
以便确定检验结果能否用于相对应病人的辅助诊断。
阳性:检测组织目标细胞可观察到棕黄色细胞质，且无背景染色。
阴性:检测组织目标细胞未观察到棕黄色细胞质。
【检验方法局限性】
免疫组化是一种多步骤病理诊断的过程，试剂的选择，组织的选择，固定和处理，切片的准备，染色及结果
的解释需要进行专门的培训。
任何阳性或阴性结果的解读，应由病理医生结合病理形态、临床表现及其他检测方法进行，不作为单独的诊
断指标。
不恰当的染色前组织处理直接影响染色效果，造成假阳性、抗体定位不准或者假阴性。结果不一致可能是由
样本固定和包埋方法不同或者组织样本内固有差异造成的。
复染过度或不足可能影响结果的判读。
阴性结果表示未检出抗原，不一定样本中无该抗原存在，目的抗原编码基因变异、抗原低表达、抗
原修复不当或孵育时间不足等，都会造成该抗原无法检出。
假阳性的结果可能是由蛋白或底物反应产物的非免疫学结合造成的，也可能是由红蛋白和细胞色素 C
造成的。
【产品性能指标】
装量：试剂盒各组份的溶液装量应不少于标示装量。
符合性：取符合性组织片（包括阳性组织对照和阴性组织对照），经相应的免疫组化实验后，应阳性着色定
位准确，且无背景染色；同时，空白对照和阴性对照染色结果为阴性。
批内重复性：取同一批次的试剂盒，检测组织片 3 片，染色强度和定位无明显差异。
【注意事项】
本染色液仅用于免疫组化，不做其他用途。
本染色液仅限专业人员使用。
应用适当的防护措施，以避免试剂同皮肤和眼睛接触。
若将本染色液中的组分与其他公司的产品混合使用，在染色过程中可能出现异常情况。
超过有效期的试剂活性可能降低，因此不得使用过期的试剂盒。
脱蜡不彻底，容易影响染色效果，建议免疫组化切片脱蜡与常规 HE 脱蜡分开。
为防止可能出现的假阳性、假阴性结果，在实验过程中需设置阳性与阴性对照。
实验中滴加试剂时，过多的 PBS 缓冲液会导致试剂被稀释，将引起染色强度变弱，因此，滴加试剂前应除去
多余的缓冲液。
产品说明书